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小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISAkit試劑盒說明書*上海滬崢！您做實(shí)驗(yàn)的*伙伴！

英文名稱：mouse adrencocorticotropic hormone,ACTH ELISA kit

小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISAkit試劑盒說明書的使用注意事項(xiàng)：

　　1、elisa試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4、請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)后再測定，計(jì)算時(shí)請乘以總稀釋倍數(shù)。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、elisa試劑盒的底物請避光保存。

　　7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

　　8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　elisa試劑盒試驗(yàn)需要要恪守以下3個(gè)中心原理：

　　（1）抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性。

　　（2）抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性。

　　（3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可依據(jù)參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在，并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，胰島素elisa試劑盒可依據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

ELISA試劑盒使用方法。在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將elisa試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存，用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確，吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差，要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過百分之2。

　　1、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

　　2、血漿：應(yīng)根據(jù)elisa試劑盒的標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

　　3、尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　4、細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　5、組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　6、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

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