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| 產地 | 國內 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZS0271 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進口 |
產品名稱： 禽流感病毒N6亞型檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
檢測方法： 實時熒光 PCR
規 格： 50T
保存方式： 2~8℃
有 效 期： 1年
產 地： 中國
用 途： 僅用于科研實驗
訂購流程：禽流感病毒N6亞型檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
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ELISA常見問題：禽流感病毒N6亞型檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
利用ELISA進行檢驗常見的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。
1、抗原：ELISA抗原有三類：液體中純化的自然抗原、合成抗原和基因重組抗原。
純度不高可導致試劑盒的特異性不強，合成抗原一般都是多肽抗原，
試劑盒一般為基因重組抗原。抗原純度不高，特異性就不強，
2、抗體特異性和親和力的大小會影響試劑盒的特異性和敏感性
3、酶結合物，試劑盒的保存時間通常由酶的穩定性決定。
最常用的就是辣根過氧化酶-HRP.其他還有堿性磷酸酶和β半乳糖苷酶。
ELISA溫浴和洗滌一般為磷酸鹽緩沖液（PBS）
堿性磷酸酶的話就不能用PBS洗滌了，因為殘留的PBS會抑制一半的酶活性。
TMB顯色液取代了OPD為HRP最常用的色原底物。為氧化還原反應（OPD對機體有突變作用，所以改用TMB）
操作步驟
1 病毒 RNA 的提取
1.1 取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照，分別加入裂解液 600 μL，充分顛倒混勻，室溫靜置 3～
5 min。
1.2 將液體吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液體時盡量不要吸到懸浮雜質，以免離心時 堵塞吸附柱），13000 rpm 離心 30 s。
1.3 棄去收集管中液體，加入 600 μL 洗液，13000 rpm 離心 30 s。
1.4 重復步驟 1.3。
1.5 棄去收集管中液體，13000 rpm 空柱離心 2 min，以除去殘留的洗滌液。
1.6 將吸附柱移入新的 1.5 mL 離心管中，向柱中央加入洗脫液 50 μL，室溫靜置 1 min，13000 rpm
離心 30 s，離心管中液體即為模板 RNA。
2 實時熒光 RT-PCR 操作
設被檢樣品、陰性對照和陽性對照總和為 N，則反應體系配制如下： 試劑 體系
無菌無核酸酶水 2.7（N+1）μL
RT-PCR 反應液 10（N+1）μL
酶混合液 0.4（N+1）μL
熒光探針 1.9（N+1）μL
將以上配制的反應體系充分混勻后，分裝每個反應管中各 15 μL。
分別取 5 μL 模板 RNA，加入相應反應管中，混勻并作好標記，在熒光 PCR 儀上進行以下反應：
45 ℃ 15 min，95 ℃ 1min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，在每個循環第二步（60℃ 35s）收集熒光信號，共
40 個循環。（報告基團“FAM”，淬滅基團“None”）。
結果判定
1 結果分析條件設定 閾值設定原則：閾值線設定于剛好超過陰性對照擴增曲線的點。不同儀器可根據儀器噪音
情況進行調整。
2 結果描述及判定
陽性對照 Ct 值≤30 并出現特定的擴增曲線，陰性對照無 Ct 值并且無特定擴增曲線，實驗結果成 立；被檢樣品 Ct 值≤30 并出現特定的擴增曲線為 AIV 陽性；被檢樣品 30＜Ct＜37 并出現特定的擴 增曲線，需重新取樣提取 RNA，擴增后進行結果判定，如仍是可疑，可判定為陽性；被檢樣品 Ct 值≥37 時，超過本方法檢測靈敏度范圍，判定為陰性；對于某些未呈現 S 型曲線，但本底較高的樣 品，應為陰性。
