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| 產地 | 國內 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZW0716 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規格 | 48T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進口 |
牛結節疹病毒(LSDV)核酸檢測試劑盒(PCR法)
【儲存條件及有效期】
-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰壺。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1 樣本前處理
組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿，勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中；
液體標本：取適量標本13000rpm離心2min，棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13,000 rpm離心5分鐘，取上清液轉移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2. 試劑配制（試劑準備區）
根據代檢測樣本總數，設所需要的PCR反應管管數為N（N=樣本數+1
管陰性對照+1管陽性對照），體系配制如下表：
試劑
WSSV 反應液
酶液
用量（樣本數為N）
20μl
1μl
3. 加樣（樣本處理區）
將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μl，加入相應的
反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR擴增（核酸擴增區）
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內；
5. 結果分析判定
結果分析條件設定
設置基線（baseline）：一般情況下，對ABI 7500、7700等儀器設為6-15cycle，對PE5700設為3-15cycle,對MJ Research Option2設為6-12cycle。特殊情況可對基線適當調整。
設置閾值（threshold）:以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線（無規則的噪音線）的zui高點。
結果判斷
陽性：檢測樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數增長期；
可疑：檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復一次實驗，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數增長期，為陽性，否則為陰性；
陰性：檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對檢驗結果的解析
實驗室環境污染，試劑污染，標本交叉污染會出現假陽性結果；試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果。
7. 質控標準
陰性質控品：擴增曲線無對數生長期或無Ct值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯對數生長期，且Ct值≤32;
以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
◆ 注意事項
1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區操作。
1）第一區：樣本制備區。
2）第二區：模板添加區。
3）第三區：擴增及產物分析區。
★ 分區之間*進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。
2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。
3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應避免反復凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
5．反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。
6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內使用。
實驗操作
1.模板制備（樣本制備區）
建議使用配套水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產品，具體過程詳見產品說明書。
2.添加模板（模板添加區，放置于冰盒上進行）
剪下所需測試數的已含有反應液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，向每管反應液中分別加入5μL模板，順序為NG、待測樣品模板、PG-VH-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進行PCR擴增反應。
3. 擴增反應（擴增及產物分析區）
使用熒光定量PCR儀，熒光基團選擇FAM，淬滅基團選擇TAMRA。
