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| 產(chǎn)地 | 國(guó)內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HZW6543 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 是否進(jìn)口 |
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱：新城疫病毒中強(qiáng)毒(NDV-W)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
【包裝規(guī)格】50 份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測(cè)的血清或血漿、疑似污染 NDV-W 的活病
毒疫苗等標(biāo)本中禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒 RNA，適用于禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病
毒感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
新城疫病毒中強(qiáng)毒(NDV-W)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)【檢驗(yàn)原理】
-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個(gè)月。
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
水樣便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
水樣便 13000rpm 離心 2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；疑似污染的水直接取 100μL
1) DNA 的提取也可以采用DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
本試劑盒用一對(duì)禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光
探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)
增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
名 稱 規(guī) 格
酶液 50μl×1 管
REV 反應(yīng)液 1.0ml×1 管
REV 陽(yáng)性質(zhì)控品 50μl ×1 管
陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管
說明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
新城疫病毒中強(qiáng)毒(NDV-W)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。
陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線；
可疑：檢測(cè)通道 35
陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
陰性質(zhì)控品：Ct 值>38 或無 Ct 值；
陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù) 個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
? 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；
? 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；
? 反應(yīng)液應(yīng)避光保存；
? 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；
? 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；
? 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通 則》進(jìn)行處理。
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