|
| 產(chǎn)地 | 國(guó)內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HZT2137 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 |
絮狀支原體（Mycoplasma Flocculare）和豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae）都是存在于豬呼吸道的傳染性細(xì)菌，根據(jù)抗原組合物和基因組分析判斷，這兩種支原體親緣關(guān)系較近。豬肺炎支原體是豬的地方性肺炎的病原體，而絮狀支原體一般是非致病性的，可能在豬肺炎支原體侵襲機(jī)體時(shí)造成機(jī)會(huì)感染。這兩種支原體有著與大多數(shù)支原體不同的特征，即很難培養(yǎng)和在固體培養(yǎng)基上的菌落外觀不是典型的“煎蛋”樣子。絮狀支原體大小和形狀不是固定不變的，特別是在生長(zhǎng)后期。在生長(zhǎng)穩(wěn)定和趨向下降階段，可發(fā)現(xiàn)細(xì)絲狀細(xì)胞，這種細(xì)胞形狀在豬肺炎支原體中不存在。
由于絮狀支原體不引起疾病，雖然在豬群中分布廣泛，但檢測(cè)方法很少，主要還是體外培養(yǎng)法，耗時(shí)較長(zhǎng)。使用PCR法可以對(duì)絮狀支原體進(jìn)行檢測(cè)，靈敏度高，且檢測(cè)時(shí)間短，僅需幾個(gè)小時(shí)即可獲得結(jié)果。
絮狀支原體PCR檢測(cè)試劑盒選取了16S rRNA基因的一段序列進(jìn)行PCR鑒定，引物經(jīng)BLAST驗(yàn)證為特異性靶向絮狀支原體，與其他生物的基因組無交叉反應(yīng)。使用本試劑盒檢測(cè)了絮狀支原體、豬肺炎支原體、豬滑液支原體（Mycoplasma Hyosynoviae）和豬鼻支原體（Mycoplasma Hyorhinis）等共19個(gè)菌株和分離株，只有絮狀支原體產(chǎn)生特異性擴(kuò)增條帶。可見本試劑盒具有物種特異性，可用于絮狀支原體的鑒定和檢測(cè)。
絮狀支原體PCR檢測(cè)試劑盒【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿，勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中；
液體標(biāo)本：取適量標(biāo)本13000rpm離心2min，棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入40ul 核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13,000 rpm離心5分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)代檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N（N=樣本數(shù)+1
管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照），體系配制如下表：
試劑
WSSV 反應(yīng)液
酶液
用量（樣本數(shù)為N）
20μl
1μl
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl，加入相應(yīng)的
反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；
5. 結(jié)果分析判定
絮狀支原體PCR檢測(cè)試劑盒結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線（baseline）：一般情況下，對(duì)ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle，對(duì)PE5700設(shè)為3-15cycle,對(duì)MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對(duì)基線適當(dāng)調(diào)整。
設(shè)置閾值（threshold）:以閾值線剛超過陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線（無規(guī)則的噪音線）的zui高點(diǎn)。
結(jié)果判斷
陽性：檢測(cè)樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期；
可疑：檢測(cè)樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復(fù)一次實(shí)驗(yàn)，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期，為陽性，否則為陰性；
陰性：檢測(cè)不到樣本Ct值或Ct值為40。
試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。.
|
|
|
|
|
|
