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| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZT2138 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進口 |
差異脲原體PCR檢測試劑盒
差異脲原體（Ureaplasma Diversum）1969年*被分離出來，最初被定義為非致病性物種，但是最近已證明它會對牛組織細胞和器官造成損傷。 差異脲原體常見于牛的生殖道，與這些動物的主要生殖器官疾病有關(guān)。受感染的母牛可能出現(xiàn)不孕、胎盤炎、胎牛肺泡炎和流產(chǎn)或弱小犢牛出生的現(xiàn)象，而在公牛中它可能導(dǎo)致精子活力低下、精囊炎和附睪炎。盡管如此，差異脲原體和牛生殖異常之間的關(guān)系仍然存在爭議，主要是因為在正常繁殖的動物中也有高比例的陽性檢出率。差異脲原體是一種兼性細胞內(nèi)微生物，既可以在細胞內(nèi)檢測到，也可以粘附在細胞表面。它對牛精子的侵入與精子活力低有關(guān)，表明它可能導(dǎo)致這些細胞的死亡。它也能誘導(dǎo)實驗感染小鼠的子宮產(chǎn)生TNF-α，表明它可能顯著改變子宮微環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。差異脲原體對這些細胞和組織發(fā)揮毒力和致病性的分子機制大多是未知的。
體外培養(yǎng)法和PCR法均可用于檢測差異脲原體。體外培養(yǎng)法是經(jīng)典的檢測方法，但耗時較長，而使用PCR法則有靈敏度高和特異性強的優(yōu)點，且檢測時間短，僅需幾個小時即可獲得結(jié)果。
差異脲原體PCR檢測試劑盒選取了16S rRNA基因的一段序列進行PCR鑒定，引物經(jīng)BLAST驗證為特異性靶向差異脲原體，與其他生物的基因組無交叉反應(yīng)。使用本試劑盒檢測了5種牛寄生性支原體，僅有差異脲原體產(chǎn)生特異性擴增條帶；而對168個生殖異常牛的陰道拭子檢測的結(jié)果顯示，有64個呈陽性，靈敏度高于體外培養(yǎng)法。可見本試劑盒具有物種特異性，可用于差異脲原體的鑒定和檢測。
差異脲原體PCR檢測試劑盒【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿，勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中；
液體標本：取適量標本13000rpm離心2min，棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13,000 rpm離心5分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據(jù)代檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N（N=樣本數(shù)+1
管陰性對照+1管陽性對照），體系配制如下表：
試劑
WSSV 反應(yīng)液
酶液
用量（樣本數(shù)為N）
20μl
1μl
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl，加入相應(yīng)的
反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；
5. 結(jié)果分析判定
差異脲原體PCR檢測試劑盒結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線（baseline）：一般情況下，對ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle，對PE5700設(shè)為3-15cycle,對MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對基線適當調(diào)整。
設(shè)置閾值（threshold）:以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線（無規(guī)則的噪音線）的zui高點。
結(jié)果判斷
陽性：檢測樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期；
可疑：檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復(fù)一次實驗，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期，為陽性，否則為陰性；
陰性：檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。.
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