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| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HXG557 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
牛結(jié)節(jié)性皮膚病（LSDV）試劑盒（熒光-PCR法）為滬崢生物主要產(chǎn)品，滬崢生物堅(jiān)守品質(zhì)、銳意進(jìn)取，滿足于每一位老師的實(shí)驗(yàn)要求，廠家供貨，品質(zhì)保證，價(jià)格優(yōu)惠,歡迎來電咨詢！
規(guī)格：50T/盒
本試劑盒用牛結(jié)節(jié)性皮膚病（LSDV）特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對牛結(jié)節(jié)性皮膚病（LSDV）進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于對可疑感染者的病原學(xué)診斷。【儲存條件及有效期】
-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。
【適用儀器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運(yùn)輸】
牛結(jié)節(jié)性皮膚病（LSDV）試劑盒（熒光-PCR法）樣品處理（樣本處理區(qū)）
1. 樣本前處理
組織樣品：每份組織分別從 3 個(gè)不同的位置稱取樣品約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中
1) DNA 的提取也可以采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
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試劑 |
APP 反應(yīng)液 |
酶液 |
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用量（樣本數(shù)為 N） |
20μL |
1μL |
將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye） NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
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步驟 |
循環(huán)數(shù) |
溫度 |
時(shí)間 |
收集熒光信號 |
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1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
|
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
|
55℃ |
30sec |
是 |
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。
陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；
可疑：檢測通道 35值≤38，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35值≤38， 且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
陰性質(zhì)控品：Ct 值>38 或無 Ct 值；
陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。
? 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
? 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
? 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
? 不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
? 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定 量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；
? 本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項(xiàng)】
? 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；
? 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；
? 反應(yīng)液應(yīng)避光保存；
? 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；
? 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
? 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通 則》進(jìn)行處理。
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