牛呼腸孤病毒PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn):具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等特點(diǎn),值得信賴的PCR技術(shù)新方法
包含了目的基因和管家基因的引物、taqman探針(熒光探針)、反轉(zhuǎn)錄試劑、熒光定量PCR試劑、用戶只需將提好的RNA加入就可以進(jìn)行熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，操作方便簡(jiǎn)單、適合多種 熒光定量PCR儀，同時(shí)也避免了自己設(shè)計(jì)、合成引物探針的煩惱。
試劑盒準(zhǔn)備物品：
清理液（A） 毫升
染色液（t B） 微升
稀釋液（C） 毫升
溶解液（tD） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
牛呼腸孤病毒PCR檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)：
1．基礎(chǔ)程序。
2．?dāng)U增溫度和延伸溫度。
3．反應(yīng)時(shí)間。
4．循環(huán)次數(shù)。
5．PCR 反應(yīng)液的配制。
6．PCR技術(shù)的基本原理。
7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)。
8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
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